системная биология и физиология
Кальциевая сигнализация регулирует ретракцию ламеллиподий в хемотактирующих нейтрофилах человека
Рисунок 1. Методы наблюдения кальциевой сигнализации в нейтрофилах, движущихся вокруг растущего тромба. (А) Типичное изображение растущей ламеллиподии нейтрофила. Белой точкой показан край растущей ламеллиподии. Шкала 20 мкм. (Б) Схема эксперимента: цельная кровь, окрашенная флуоресцентной меткой Fura RED, прокачивалась через плоско-параллельную проточную камеру в течение 30 минут. (В) Пример области, в котором измерялась флуоресценция Fura RED (белый круг). Шкала 20 мкм. (Г) Типичный вид динамики концентрации кальция (F405/F488) для одиночного нейтрофила.
Рисунок 2. Экспериментально наблюдаемый кальциевый ответ в нейтрофилах не влияет на подвижность клеток, но регулирует ретракцию ламеллиподий. А. Типичный кальциевый ответ в движущемся нейтрофиле. Ретракция ламеллиподий (красная стрелка) сопадает по времени с пиком концентрации кальция. На графике представлен типичный ответ из N = 16 событий ретракции ламеллиподий из 12 проанализированных клеток для 3 здоровых доноров. Б. В типичном нейтрофиле кальциевый ответ не коррелирует с подвижностью нейтрофила. На графике представлен типичный ответ из N = 12 проанализированных клеток для 3 здоровых доноров. В. Временная задержка между ретракцией ламеллиподии и ближайшим по времени кальциевым пиком. С помощью критерия Уилкоксона (p = 0,03) показано, что временная задержка не распределена нормально со средним Δt = 0 сек. Г. Скорости нейтрофилов, в которых уровень кальция постоянен, значительно выше, чем в клетках, в которых наблюдается динамический кальциевый ответ.
Проанализировано N = 21 клеток для 3 здоровых доноров. *** - p<0,001. Статистическая значимость рассчитана с помощью теста Манна-Уитни.
Имитация внеклеточного матрикса на основе полимеров для создания модели микроокружения опухоли
Рисунок 1. Обзор тройной спирали коллагена. (a) Первая кристаллическая структура высокого разрешения тройной спирали коллагена, образованной из (ProHypGly)4-(ProHypAla) (ProHypGly). (b) Вид по оси тройной спирали (ProProGly) с тремя нитями, изображенными в виде заполнения пространства, шара и палочки, а также ленты. (c) Изображение сегмента тройной спирали коллагена в виде шарика и палочки, подчеркивающее лестницу межнитевых водородных связей. (d) Поэтапное расположение трех нитей в сегменте на панели c [9].
Рисунок 2. SEM-структура скаффолдов, сшитых при разных температурах. Зависимость размера пор от температуры образования: при увеличении температуры полимеризации растер размер пор [32].
Рисунок 3. Методы формирования клеточных сфероидов [56].
Формула 1.
Формула 2.
Взаимодействие протромбина с субпопуляциями активированных тромбоцитов
Рисунок 1. Связывание протромбина с субпопуляции активированных тромбоцитов. На рисунке приведены типичные точечные диаграммы. А – выделение региона тромбоцитов по прямому и боковому светорассеянию. Б- связывание протромбина с популяциями активированных тромбоцитов до исключения из рассмотрения агрегатов ФС-положительных и ФС-отрицательных тромбоцитов. Зеленым показана субпопуляция ФС-положительных тромбоцитов, красным -ФС-отрицательных тромбоцитов, синим – события с высоким связыванием протромбина в регионе ФС-отрицательных тромбоцитов. В- выделение агрегатов ФС-положительных и ФС-отрицательных тромбоцитов. Зеленым показаны тромбоциты, окрашенные кальцеином, красным – окрашенные FuraRed, синим – события окрашенные и кальцеином, и FuraRed. Г - связывание протромбина с популяциями активированных тромбоцитов после исключения из рассмотрения агрегатов ФС-положительных и ФС-отрицательных тромбоцитов. Зеленым показана субпопуляция ФС-положительных тромбоцитов, красным -ФС-отрицательных тромбоцитов, синим – события с высоким связыванием протромбина в регионе ФС-отрицательных тромбоцитов. Представлены результаты типичного эксперимента из трех, проведенных с кровью разных доноров.
Рисунок 2. Неспецифическое взаимодействие флуорофора с активированными тромбоцитами. Черным цветом показано связывание протромбина-Alexa647 с активированными тромбоцитами в присутствии ЭДТА. Красным показано взаимодействие флуорофора Alexa647 активированными тромбоцитами.
Рисунок 3. Связывание протромбина с субпопуляции активированных тромбоцитов. А – равновесное связывание с ФС-положительными (черная кривая) и ФС-отрицательными (красная кривая) тромбоцитами. Связывание оценивали методом проточной цитометрии. На графике приведены средние±SD (n=3). Б - кинетика связывания и диссоциации протромбина-Alexa647 с фосфатидилсерин положительными тромбоцитами. Связывание протромбина-Alexa647 анализировали с помощью проточного цитометра в моменты времени: 0; 1; 2; 5; 10; 15; 20 минут после добавления белка. После достижения насыщения, образцы разводили в 20 раз буфером Тироде с CaCl2 (2,5 мМ), для анализа диссоциации белка. На графиках приведены средние±SD (n=4).
Рисунок 4. Распределение флуоресцентно меченного протромбина на мембране активированных тромбоцитов. Типичные микрофотографии активированных тромбоцитов. Зеленым показана флуоресценция CD61-ФИТЦ, пурпурным - флуоресценция Alexa647-ФII. В первом ряду показаны ФС-отрицательные тромбоциты, во втором ФС-положительные. Приведенный масштаб соответствует 3 мкм.